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混合淋巴细胞培养试验(mixedlymphocyteculture,MLC)是一种测定受体和供体主要组织相容性抗原(HLA抗原)相容程度的试验方法,常用于器官移植前的组织配型.混合淋巴细胞培养将供者与受者的淋巴细胞做双向混合培养,或者灭活供者的淋巴细胞做向混合培养,细胞反应的程度与供-受者相容的程度呈负相关的试验。
形态计数法:转化率0.05。
异常结果:肾移植时,活体供肾者的转化率应10%。只能在同一批实验中选用低反应配组。淋巴细胞转化率10%者为不同两个体间的组织是相容的。淋巴细胞混合培养试验用以检测患者的免疫状态。T淋巴细胞数减少时,转化率也降低。可作为器官和骨髓移植的配型方法之一,用来选择合适的供体。如转化率高为供受者分歧用。转化率低,移植后的成功率高。
需要检测人群:免疫力受损或者缺失的人群。
检查时:本试验可作为器官移植筛选供体的方法,转化率低者移植成功率高,转化率高者成功率低。
不适宜人群:排斥反应大的人。
1、供体淋巴细胞的制备
新鲜外周静脉血按1∶1比例加在装有比重为1.077的淋巴细胞分离液的离心管中,轻稳加在液面上.2000r/min离心20min,吸取中间雾状淋巴细胞层.生理盐水洗涤2次.台盼蓝染色,计数板计数.调整细胞密度为2×109/L,分成3管,各自离心,留取沉淀.每管中加入250μL丝裂霉素(终浓度50mg/L)和1.75mL生理盐水,37℃水浴40min,生理盐水离心洗涤2次.用含100mL/L胎牛血清的RPMI1640液调整细胞密度为1×1010/L.加入抗体封闭抗原.标记为D
2、受体淋巴细胞的制备
新鲜外周静脉血按1∶1比例加在装有比重为1.077的淋巴细胞分离液的离心管中,轻稳加在液面上.2000r/min离心20min,吸取中间雾状淋巴细胞层.生理盐水洗涤2次.用含120mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液调整细胞密度为1×1010/L.标记为R.
3、混合淋巴细胞培养
将已制备好的R和D按如下分组加入96孔板,置37℃,50mL/LCO2孵箱中培养24h.A组:R50μL+D50μL;B组:R50μL+D50μL+I纯化中和mAb15μL;C组:R50μL+IL?2纯化中和mAb15μL;D组:R50μL.每组3个复孔,空白对照组为RPMI1640培养液100μL.
不适宜人群:排斥反应大的人。
暂无相关并发症和危害。