新鲜活肿瘤组织冻存操作步骤

概述

活肿瘤组织冻存试剂盒及配套产品可实现长期保存肿瘤组织，维持与新鲜肿瘤组织几乎相同的形态特征和功能。活肿瘤组织用于建立PDX模型即人源性肿瘤动物模型，这种模型在肿瘤的研究和个体化诊疗有重要的意义。由于高度模拟患者肿瘤的生物特征，PDX模型被认为是最好的肿瘤研究模型，用于药物研发、测试和生物标志物鉴定。

步骤/方法：

1、 1、在组织冻存管上记录清楚肿瘤组织的相关信息；2水浴加热并维持玻璃化液1、玻璃化液2为26℃；注意：在后续使用玻璃化液1、玻璃化液2时，维持液温为26℃，有利于提高组织复苏后的存活率。

2、 3在100mm培养皿中，用生理盐水清洗肿瘤组织，使用眼科剪、眼科镊修剪去除血管、包膜以及坏死组织；4、使用组织处理模具将肿瘤组织切成1mm厚的薄片；注意：经验证，组织切片的最佳厚度为1mm。

3、 5、在100mm培养皿中，用生理盐水再次清洗切好的组织，并用无菌纱布吸除组织表面的液体；6、使用平口镊将肿瘤组织切片浸入V1管中的10ml玻璃化液1中，26℃，25min。

4、 7、将V1管中的液体及组织切片全部倒入100mm培养皿中，在移入V2管前使用无菌纱布尽量将组织表面的玻璃化液1吸除；注意：尽量减少组织切片从玻璃化液1移入玻璃化液2之间的操作时间。

5、 8、使用平口镊将组织切片移入V2管中的10ml玻璃化液2中，26℃，15min或者待组织切片自然沉降至管底；注意：如果组织切片在15min内没有自然沉降至V2管的管底，等待至其沉至管底；如果组织切片早于15min沉至管底，让组织切片在V2管内浸泡至少15min。

6、 9、将组织切片平铺摆放于组织支架上；10、将组织支架平放于无菌纱布上，尽量吸除组织切片表面的液体；11、使用有齿镊将组织支架快速浸入无菌液氮，时间不少于5min。接下来是最后一步。

7、 12、快速将组织支架移入组织冻存管内，旋紧冻存管，将冻存管移入液氮罐中保存。注意：在组织支架移入组织冻存管前，检查组织切片是否透明，透明的组织切片意味着组织切片成功被玻璃化。

注意事项：

在后续使用玻璃化液1、玻璃化液2时，维持液温为26℃，有利于提高组织复苏后的存活率。经验证，组织切片的最佳厚度为1mm。尽量减少组织切片从玻璃化液1移入玻璃化液2之间的操作时间。