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肌钙蛋白是肌肉收缩的调节蛋白,由三个结构不同的亚基组成,即肌钙蛋白T(TnT)、肌钙蛋白I(TnI)和肌钙蛋白C(TnC。肌钙蛋白放松了肌动球蛋白,让肌动球蛋白与肌浆球蛋白互起作用,而造成肌肉收缩。心肌中的T和I亚基结构不同于其他肌肉组织,心肌钙蛋白T、I(CTnT、CTnI)由于分子量小,所以发病后血中浓度迅速升高。
(1)心肌钙蛋白T、I的快速检测:
阳性:在试验区和对照区均有色带出现。
阴性:仅在对照区有色带出现。
无效:试验区和对照区都没有色带出现。
(2)心肌钙蛋白T的ELISA法测定:
(1)急性心肌梗死(AMI),发病后血中浓度很快增高,GTnT、CTnI,3~6h超过参考值上限值,GTnT10~24h达峰值,10~15天恢复正常。CTnI14~20h达峰值,5~7天恢复正常。即出现早,和CK-MB相当或稍早;消失慢,持续时间超过LD1,诊断的窗口期特别长,兼有CK-MB和LD1的优点。灵敏度GTnT为50%~59%(0~6h),CTnI为6%~44%;特异性GTnT为74%~96%,CTnI为93%~99%。据报道GTnT在诊断AMI时比CK-MB更为灵敏,但有报道在肾脏疾病病人血样中发现GTnT,所以特异性较差。GTnT比LD1/LD2比率在诊断AMI中更为灵敏,且在肾病及其他疾病患者血液中未发现CTnI,所以CTnI是心脏受损时唯一的特异性标志物。由于GTnT和CTnI消失慢,所以,可作为心肌梗死后期标志物。
(2)GTnT和CTnI可作为心脏手术中心肌梗死症状出现的指示物,当病人接受动脉搭桥手术时,若GTnT和CTnI含量增加,表明出现心肌梗死,而此时CK-MB含量并无变化。
(1)心肌钙蛋白T、I的快速检测:
①试纸条只能用1次,重复使用无效。
②试纸条试验区和对照区均不出现色带,取另一试纸条重复检测仍无结果,则表示试纸条失效。
③免疫层析技术测定CTnT、CTnI适合床边快速试验,但只是定性或半定量,要真正了解病情严重程度及选择治疗措施还需定量测定。
(2)心肌钙蛋白T的ELISA法测定:
①CTnT待测标本最好用血清,不要用抗凝血浆,因为抗凝剂如:肝素、EDTA等对CTnT有影响。
②由于CTnT是心肌细胞损伤释放出来的,所以尽量避免标本溶血,如果标本溶血很可能造成检测结果增高。
③配制好孵育液不要冷冻保存,应放在2~8℃冷藏。
④实验前应注意试剂有无失效,如变质,其颜色加深。
⑤为了提高CTnT检测的可靠性,应注意加样的准确及其他操作过程,比色最好选用双波长。
(1)心肌钙蛋白T、I的快速检测:
①将包装纸打开,标记上样品编号。
②加5~6滴血清样品到样品槽中。
③在10~15min内观察色带出现情况。
(2)心肌钙蛋白T的ELISA法测定:
①在包被板中分别加入标准血清,对照血清和病人标本于相应的孔内各50μl。
②每孔各加孵育缓冲液50μl,并轻轻混匀。
③室温下孵育60min后洗涤三次,10min内完成。在吸水纸上用力拍打微孔。以除去残留水滴。
④每孔各加入酶结合物100μl,轻轻混匀。
⑤倒空微孔板中的孵育液,用洗涤液将微孔洗三次,在吸水纸上用力拍打微孔,以除去残留水滴。
⑥将200μl色原底物溶液加入相应的孔中,避光,轻轻混匀,静置30min。
⑦用酶标仪在10min内,于405nm和630nm双波长下测定吸光度值(OD值)。
无。
无。