各种血红蛋白的等电点不同的特点,在一定pH缓冲液中所带的正、负电荷不同,经电泳后各血红蛋白的移动方向不同。
电泳法:HbA95%、HbA21.1%~3.2%、HbA32%~3%
Singer法:HbF
一、HbA2升高,可见于维生素B12或叶酸缺乏所致的巨细胞贫血、部分轻型珠蛋白生成障碍性贫血;
二、HbA2降低:见于缺铁性贫血;
三、HbF升高:可见于纯合子β珠蛋白生成障碍性贫血、杂合子β珠蛋白生成障碍性贫血和正常新生儿。
四、其他:
1.主要成分为HbS,而无HbB,可见于镰形细胞血红蛋白病;
2.HbS、HbF和HbA2轻度增加,而HbA极少或消失,结合调查可诊断为HbS-β-海洋性贫血,多见于地中海地区。
3.除HbS外,含有10%-30%HbA和轻度增高的HbF及HbA2,也可考虑HbS-β-海洋性贫血;
4.HbS占20%-30%,HbA占65%-75%,并含有正常的HbF和HbA2,可诊断为HbS-α-海洋性贫血;
5.HbA消失,HbC占总血红蛋白的28%-44%,可诊断为血红蛋白病,多见于黑人,血片中可见较多的靶形细胞;
6.有HbS,还出现HbD,血片中有靶形细胞,可诊断为血红蛋白D病,我国北方较多见;
7.电泳结果出现HbE,可诊断为血红蛋白E病,主要见于东南亚、印度等,我国以广东南部多见。
微量血红蛋白电电泳:
①浸膜:将醋酸纤维素膜漂浮于TEB缓冲液表面,待其均匀浸透沉下后,至少20min才可使用。这样可防止产生气泡。
②点样:取出醋酸纤维薄膜用滤纸吸去多余的水份。用微量吸管吸取血红蛋白溶液置于多标本加样器的凹型槽内,以多标本加样器蘸取血红蛋白液,点样于醋酸纤维素膜无光泽面。距阴极端1.5~2cm处,点样量约3~5μl同时平行地点上正常血红蛋白溶液作对照。
③电泳:在微型电泳槽两侧缓冲液槽内分别加入等量的BB缓冲液,以二层滤纸做盐桥搭在醋酸纤维薄膜支架上。将膜无光泽面向下,点样端接负极,平衡5min。接通电源。电压180V,电流量约为0.2mA/cm膜宽,电泳时间20~30min。槽中缓冲液可在倒换电极后再用1次。
④染色:电泳后的薄膜放在丽春红染色液中染色10min左右取出,用3%醋酸漂洗数次,至背景呈白色,阴干。
⑤透明:将醋酸纤维素膜置透明液中浸湿,贴于洁净玻璃板上,用玻棒赶去二者之间的气泡。于一层析缸内倒少量冰醋酸,将玻璃板反盖在层析缸上(有薄膜面向内)。以挥发的冰醋酸熏10~20min,待膜透明即可取下。
蜡酸纤维薄膜电泳直接比色法:
试剂:同醋酸纤维素膜微量血红蛋白电泳。
操作:
(1)将醋酸纤维素膜作1/3切开(4cm×8cm)漫于TEB缓冲液中,10min以上。
(2)取出醋酸纤维素膜用滤纸吸去多余的水份。以Hb吸管吸取100g/L溶血液10μl均匀涂于玻璃推片下缘,在距薄膜阴极端1.5~2.0cm处于无光泽面点样。每个标本同时做两份。
(3)电泳:缓冲液同微量血红蛋白电泳。电压180V,时间40min~1h。(以各区带明显分开为宣)电泳后交换电极,缓冲液可反复使用。
(4)洗脱与定量分别剪下HbA,HbA2和相当于HbA2大小的对照区带。如有异常Hb区带(HbX)也同时剪下,各自放在相应的试管中。于HbA管中加TEB缓冲液10ml,其余各管加TEB缓冲液2ml,浸泡30min,时时振摇。待完全洗脱后。将
洗脱液混匀,用721分光光度计,波长413nm。以空白调零,测各管吸光度。
(5)计算:
如有异常HbX,则计算HbA2%时,分母中还要加:HbX吸光度。
HbX%=
无禁忌人群。
感染的风险:如果使用了不洁针头穿刺就有可能有感染的风险。