人胰岛素原(proinsulin)是胰岛素的前体物质,由胰岛素和C肽组成,具有双重免疫活性,既可与胰岛素抗体结合,又可与C肽抗体结合。胰岛素原由胰岛β细胞合成和分泌,主要在肾脏分解代谢。生理情况下,只有极少量的胰岛素原释放入血,在病理情况下,胰岛β细胞释放胰岛素原增多,血中胰岛素原水平升高。
各实验室依具体情况确定。
放射免疫法:<0.2μg/L。
(1)糖尿病患者血浆胰岛素原水平明显升高。1型糖尿病由于胰岛胰岛素合成和分泌极度下降,刚合成的胰岛素原在未转变为胰岛素的情况下即释放入血,造成血浆胰岛素原升高。研究证明,部分表现为高胰岛素血症的2型糖尿病患者其实为高胰岛素原血症,是因为胰岛β细胞功能障碍,胰岛素原分泌增多所致。
(2)胰岛β细胞瘤、家族性高胰岛素血症患者血浆胰岛素原水平明显升高。
(3)慢性肾功能不全时,胰岛素原的分解代谢降低,可致血浆胰岛素原升高;甲亢时亦可出现血浆胰岛素原水平升高。
(1)在操作过程中加量务必精确。
(2)碘化钾、氯胺T及偏焦亚硫酸钠溶液在使用前几分钟配制。其他溶液可于-20℃贮存。
(3)加入葡聚糖活性炭后,在4℃静置15min,不要延长时间或升高温度,否则会导致沉淀计数增加。
(4)如市上有胰岛素放免试剂盒出售,可省略抗胰岛素抗血清制备,胰岛素标记等步骤,操作方法须严格按照试剂盒所附说明书进行。
(1)胰岛素碘标记物制备和纯化:
①取Na125I3.7×107Bq置于含胰岛素2μg(20μl)的反应管内。
②加氯胺T溶液10μl。
③立即盖紧,轻敲小管使试剂快速混和。
④12~15s后,加偏焦亚硫酸钠溶液25μl(62.5μg)。
⑤把管内容物加至SephadexG-50柱上,用测定缓冲液洗涤,每管0.5ml收集45管,再用γ计数器计数。第一峰为125I标记的活性胰岛素,第二峰是没有结合的放射性碘。
(2)标记激素的免疫反应性估价:取第一峰收集物,以测定缓冲液稀释至5000cpm/0.1ml,取0.1ml该标记物于小试管中,加入过量抗血清(0.1ml)及0.1ml测定缓冲液,在4℃温育24h,然后加1ml葡聚糖活性炭悬浮液,在适当搅拌后,试管在4℃静止15min,然后再离心15min,丢弃上清液,计数沉淀,沉淀计数应少于加入量的5%,如计数增加,指示125I-胰岛素破坏。
(3)抗血清滴定:将抗血清系列稀释,从1∶320000至1∶10000测定时,在小试管中加0.1ml测定缓冲液,0.1ml稀释的抗血清,0.1ml稀释的标记胰岛素。在4℃温育20h,然后加1ml葡聚糖活性炭,适当搅拌后,在4℃温育15min后,再离心15min。丢弃上清液,测量沉淀物放射性计数,计数以加入量(F/T%)的35%~60%为合适的抗体稀释度。
(4)胰岛素测定:标准管与测定管做双份,具体操作如下表(表1):
1、服用过避孕药、甲状腺激素、甾体激素等药物的患者,因为可能会影响到检查结果,禁止近期有以上药物服药史的患者检查。
2、特殊疾病:患有造血功能减低疾病的患者,比如白血病,各种贫血,骨髓增生异常综合症等,除非该检查必不可少,尽量少抽血。
1、皮下出血:由于按压时间不足5分钟或是抽血技术不过关等原因可导致皮下出血。
2、不适感:穿刺部位可能会出现疼痛、肿胀、压痛、肉眼可见的皮下瘀斑等。
3、晕血或晕针:在抽血时,由于情绪过度紧张、恐惧、反射性引起迷走神经兴奋、血压下降等导致脑供血不足引发晕针或晕血。
4、感染的风险:如果使用了不洁针头穿刺就有可能有感染的风险。