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抗链球菌溶血素“O”试验,简称抗“O”,是机体产生的以链球菌溶血素O为抗原的抗体。通过测定血清中的ASO抗体效价,来判断病人有无A族溶血性链球菌感染,可作为A族溶血性链球菌感染性疾病的辅助诊断方法之一。但本试验无特异性意义,因为A族链球菌感染后,可引起人类多种疾病,如链球菌感染引起相应的扁桃体炎、猩红热、急性肾炎、亚急性细菌性心内膜炎、肾病综合征等均可引起ASO升高。人感染溶血性链球菌后,血清中可以出现多种抗体,如抗链激酶抗体、抗透明质酸抗体和抗“O”溶血素抗体,而抗“O”溶血素抗体对检测风湿病是否活动的一种血清学诊断试验较有意义。风湿病活动期60%~80%的病人ASO是升高的,多次检测均正常有助于排除风湿病。
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(1)升高:
①溶血性链球菌感染、猩红热、丹毒、链球菌性咽炎、扁桃体炎。对风湿热、急性肾小球肾炎有间接诊断价值、若多次检测结果递增、并伴有红细胞沉降率(ESR)加快可有助于诊断。
②少数非溶血性链球菌感染:病毒性肝炎、肾病综合征、结核病、结缔组织病、亚急性感染性心内膜炎、多发性骨髓瘤等。
③寒冷地区、寒冷季节。
(2)降低:药物性(水杨酸盐类、肾上腺皮质激素、抗生素)。
(1)试管或试剂被胆固醇污染,样品被细菌污染,特别是金黄鱼葡萄球菌或绿脓杆菌,均可抑制溶血素溶血活力,从而引起假阳性结果。
(2)溶血素O结合单位的标定不准确或保存不当使所含单位数跌落,将严重影响结果。故需经常用已知单位的血清作对照,以便及时发现问题。
化验取材:血液
抗溶血性链球菌“O”试验的原理:链球菌溶血素O对氧不稳定,在空气中迅速失去溶血活力,检测ASO时,先将链球菌溶血素O还原,恢复其溶血活力,再与不同稀释度的病人血清混合,继加O型红细胞或兔红细胞悬液作为指示剂。如溶血素O被血清中的相应抗体所中和,则加入的指示红细胞不被溶解。如血清中无相应抗体或抗体量不足以中和加入的溶血素,则发生不同程度的溶血现象。
试剂:
(1)溶血素O:有商品供应,按说明书稀释后使用,溶血素O活性(结合单位)的标定必须用丹麦国立血清研究所制备的WHO标准抗溶血素O抗体精确滴定。溶血素O对热不稳定,短期保存可存放于4~10℃冰箱,几个月以上应低温冰冻贮存。
(2)ASO缓冲液:取磷酸氢二钠十二水合物9.06g,磷酸二氢钠二水合物10.89g,氯化钠4.6g,使溶于少量蒸馏水后并补足至1000ml,pH值为6.5。
(3)红细胞悬液:取枸橼酸钠抗凝的兔或O型人血,用ASO缓冲液洗涤3次,最后1次洗涤后,必须经2000r/min离心10~15min,离心后尽可能吸尽无色的上清液,并以ASO缓冲液配制成5%悬液,用时轻轻摇匀。
(4)还原剂:商品还原片剂可按说明书使用,其主要成分是2∶1的无水亚硫酸氢钠和无水亚硫酸钠。也可在临用前将ASO缓冲液以2mol/L氢氧化钠校pH值到8.0,加入L-半胱氨酸盐7g/L使溶解即成。
操作方法
(1)用ASO缓冲液将血清标本稀释成1∶100和1∶500二个稀释度。
(2)按说明书建议配制1结合单位/ml的还原溶血素O,准确吸取一定量溶血素,首先用还原剂溶液稀释到最终体积的1/3左右,放置15min,使溶血素充分还原,然后准确稀释到指定体积,在45min内使用。
(3)取70×100mm小试管按表1所列步骤操作,并以已知ASO单位的标准血清作对照。
(4)结果报告:主要观察上清液是否有溶血现象,以呈完全不溶血的血清最高稀释倍数为该标本的ASO单位/ml。
无检查适应症者不宜做此项检查。
一般无并发症和危害。