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角膜上皮刮片行姬姆萨染色、Papanicolaou染色，可显示嗜酸粒细胞、细胞气球样变、多核巨细胞和单核细胞浸润等HSV感染的特征，但不能区分HSV和VZV。有滤泡性结膜炎、树枝状角膜炎者，通过对上方边缘结膜和皮肤小泡或皮肤、角膜、表层巩膜、巩膜活检组织进行荧光染色，可发现HSV-1。新鲜的树枝状、地图状角膜溃疡组织病毒分离后50%以上显示阳性。新的血清学方法可区分首次或复发HSV感染。因为只有首次感染显示HSV抗体滴度增加，急性期滴度则很低，4～6周后滴度明显增高。由于大部分成人有抗HSV抗体，呈无症状或亚临床状态。