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血培养：血培养对感染性心内膜炎的治疗具有确诊的价值，并为治疗提供依据。国内报道血培养的阳性率为25%～44%，国外为63%～92%。在应用抗生素前24～48h取3～5次血，每次10ml，发热时取血可提高阳性率。已用抗生素者其血标本用培养基稀释20倍，若用过青霉素加青霉素酶，用过头孢菌素高渗培养基。应常规作需氧及厌氧培养，必要时可针对某些特殊微生物作特殊培养。治疗结束前不应丢弃培养基，作为选择抗生素参考。
1.超声心动图 此已成为诊断感染性心内膜炎的主要手段之一，它能发现赘生物而使感染性心内膜炎得以确诊，此外还可提供有关瓣膜损害、血流动力学改变及复杂并发症的信息。近年来出现了经食管超声心动图，在感染性心内膜炎中价值明显优于M型超声心动图及经胸壁超声心动图。经食管超声心动图通过利用食管靠近心脏解剖位置的优势，使心脏结构更清晰显示。它是将超声心动图传感器置于内窥镜中，从食管内显示心脏结构，避免了经胸壁超声受胸壁和肺的干扰。Shapiro等报道了44例具有典型瓣膜赘生物的病人检查结果，经食管超声心动图检出率为33/44，而经胸壁超声心动图为23/44，两者有显著差别。而且经食管超声心动图对检测更小的赘生物更好。但超声诊断也有其局限：①可能将瓣膜钙化、增厚、瓣叶或腱索断裂看作赘生物。②不易判别病灶是否为活动性感染，尤其是复发者。③与无菌性血栓性心内膜炎不易鉴别。④超声结果正常不能排除感染性心内膜炎。
2.核素检查 例如67Ga扫描可显示感染灶。近来有报道用99mTc标记的抗NCA-95抗粒细胞抗体能在感染性心内膜炎感染灶中浓聚，可作为超声心动图的辅助诊断手段，提高感染性心内膜炎的诊断率。
3.其他 直接测定特异性病原抗原及抗体，如免疫沉淀实验和补体结合试验等。心导管造影，极少用于感染性心内膜炎的诊断，因有导致赘生物脱落的危险，仅偶尔用于了解瓣膜的严重程度和血流动力学变化。