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1.尿标本收集 外阴清洗后再用1：1000瓣洁尔灭冲洗，留中段尿送检。因其简便易行，是目前最常用的留尿方法。小婴儿可用消毒塑料袋固定在外阴部留尿，但如30分钟未留到尿流需再次消毒。导尿有带入细菌的危险，一般尽量不用。耻骨上膀胱穿刺因其在完全无菌条件下进行，结果可靠，对中段尿或导悄结果可疑者可采用。本法简便安全，术后24小时内有血尿者仅为0.6%.
2.尿常规 清洁中段尿沉渣中白细胞＞5个/HP应考虑可能为泌尿系感染。如白细胞聚集成堆或见白细胞管型及蛋白尿者则诊断价值更大，后二者更可说明肾脏受累，但仅检出白细胞乾尚不足以诊断上尿路感染。
3.尿培养及菌落计数 是诊断本病的重要依据。正常膀胱中虽无菌，但排尿时可有杂菌污染，健康小儿中段尿培养60%～70%可有细菌生长，导尿培养者38%可有菌，但菌落较少，因此只根据有无细菌生长作诊断依据往往发生错误，必须同时作菌落计数。菌落计数10万/ml以上可确诊为尿感，1～10万/ml为可是疑，少于1万/ml多系污染女孩如二次尿培养菌落均在10万/ml以上，且为同一种细菌更可确定诊断。男孩如尿标本无污染，菌落在1万/ml以上，即应考虑菌尿的诊断。采取新鲜尿液对培养很重要，如不能即时培养，应随即放在4℃冰箱内。
4.尿液直接涂片找菌 用一滴混匀的新鲜尿，置玻片上烘干，用美蓝或革兰氏染色。若在油镜下每个神都能找到一个以上细胞，表明尿内细菌在10万/ml以上。此法简单迅速，有一定可靠性，对诊断有意义。
5.菌尿辅助检查 常用者有亚硝酸盐还原试验，可作为本病过筛检查，阳性率可达80%～90%。此法简便、可靠，无假阳性，但如尿中缺乏硝酸盐；大量利尿或使用抗生素时可为阴性。